牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的步驟有哪些?
玻璃杯
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用十分廣泛的天然培養(yǎng)基,其中的牛肉膏為微生物提供碳源、磷酸鹽和維生素,蛋白胨主要提供氮源和維生素,NaCl提供無機鹽,下面跟著吱客安全網(wǎng)小編一起來看看牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的步驟有哪些吧?
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細菌生長繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質,所以可供作微生物生長繁殖之用。由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌,因此要用稀酸或稀堿將其pH調至中性或微堿性,以利于細菌的生長繁殖,下面來具體的看一下牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的步驟有哪些吧?
1、稱量
按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶化后倒入燒杯。也可放在稱量紙上,稱量后直接放入水中,這時如稍微加熱,牛肉膏便會與稱量紙分離,然后立即取出紙片。蛋白胨很易吸潮,在稱取時動作要迅速。另外,稱藥品時嚴防藥品混雜,一把牛角匙用于一種藥品,或稱取一種藥品后,洗凈、擦干,再稱取另一藥品,瓶蓋也不要蓋錯。
2、溶化
在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒攪勻,然后,在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后,補充水分到所需的總體積。如果配制固體培養(yǎng)基,將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中,再加熱溶化,在瓊脂溶化的過程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補足所失的水分。
3、調pH
在未調pH前,先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌,并隨時用pH試紙測其pH值,直至pH達7.6。反之,則用1mol/L HCl進行調節(jié)。注意pH值不要調過頭,以避免回調,否則,將會影響培養(yǎng)基內各離子的濃度。對于有些要求pH值較精確的微生物,其pH的調節(jié)可用酸度計進行。
4、過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾,以利結果的觀察。一般無特殊要求的情況下,這一步可以省去(本實驗無需過濾)。
5、分裝
按實驗要求,可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內或三角燒瓶內。分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。
(2)固體分裝分裝試管,其裝量不超過管高的1/5,滅菌后制成斜面,如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝。
6、加塞
培養(yǎng)基分裝完畢后,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內而造成污染,并保證有良好的通氣性能(棉塞制作方法附本實驗后面)。
7、包扎
加塞后,將全部試管用麻繩捆扎好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞后,外包牛皮紙,用麻繩以活結形式扎好,使用時容易解開,同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。
8、滅菌
將上述培養(yǎng)基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃,20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌,則應放入冰箱內暫存。
9、擱置斜面
將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右,將試管棉塞端擱在玻棒上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
10、無菌檢查
將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時,以檢查滅菌是否徹底。
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